技術(shù)原理

細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的階段性過(guò)程。染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段，然后大約30%的染色體DNA在Ca²⁺和Mg²⁺依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180-200 bp核小體DNA多聚體。因此在細(xì)胞凋亡晚期，DNA會(huì)被降解為180-200 bp的片段，斷裂的基因組DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）是一種不依賴于模板的DNA聚合酶，可以催化脫氧核苷酸結(jié)合到斷裂的DNA分子3'-OH末端。因此TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒可以用來(lái)檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡晚期過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是在TdT酶的作用下，在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-OH末端摻入熒光素標(biāo)記的dUTP（FITC-12-dUTP），從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)（FITC激發(fā)450-500 nm，發(fā)射515-565 nm）

實(shí)驗(yàn)方法

Step1：細(xì)胞培養(yǎng)

Step2：轉(zhuǎn)染或藥物處理

Step3：細(xì)胞收集

Step4：加tunel試劑

Step5：熒光檢測(cè)

案例展示

    組織TUNEL-IF染色

需確認(rèn)的信息

1. 是檢測(cè)細(xì)胞凋亡還是組織凋亡

2. 凋亡的具體檢測(cè)手段，是TUNEL還是流式檢測(cè)或者其他檢測(cè)方式

3. 樣本數(shù)量為多少