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技術(shù)原理
Fura 2-AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fura 2-AM的熒光比較弱,最大激發(fā)波長(zhǎng)為369 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為478 nm,并且其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度改變而改變。Fura 2-AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura 2,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fura 2和鈣離子結(jié)合后,最大激發(fā)波長(zhǎng)為335 nm(最大激發(fā)波長(zhǎng)隨離子濃度的的不同而有所不同),最大發(fā)射波長(zhǎng)為505nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為340nm,發(fā)射波長(zhǎng)為510 nm。
實(shí)驗(yàn)方法
Step1:細(xì)胞培養(yǎng)
Step2:轉(zhuǎn)染或藥物處理
Step3:加Fura 2-AM試劑
Step4:細(xì)胞收集
Step5:上機(jī)檢測(cè)
案例展示
實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1. 實(shí)驗(yàn)周期:2-3周
2. 交付標(biāo)準(zhǔn):完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、儀器)
需確認(rèn)的信息
1. 樣本種屬及類型(組織還是細(xì)胞)
2. 樣本數(shù)量
3. 是否提供試劑盒
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