TUNEL凋亡熒光法

胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進(jìn)的階段性過程。染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段，然后大約30%的染色體DNA在Ca2+和Mg2+依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180-200 bp核小體DNA多聚體。因此在細(xì)胞凋亡晚期，DNA會被降解為180-200 bp的片段，斷裂的基因組DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）是一種不依賴于模板的DNA聚合酶，可以催化脫氧核苷酸結(jié)合到斷裂的DNA分子3'-OH末端。因此在TdT酶的作用下，在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-OH末端摻入熒光素標(biāo)記的dUTP（FITC-12-dUTP），從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測（FITC激發(fā)450-500 nm，發(fā)射515-565 nm）。

實(shí)驗(yàn)流程

結(jié)果展示

                                              merge                                                                                        DAPI                                                                          TNUEL-IF

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1. 實(shí)驗(yàn)周期：2-3周

2. 交付標(biāo)準(zhǔn)：蠟塊、切片、染色圖片、實(shí)驗(yàn)報告（實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、耗材等）

需確認(rèn)的信息

1. 樣本的種屬及類型（組織or細(xì)胞）

2. 樣本的類型（固定的組織or蠟塊or切片）

3. 拍照要求