TUNEL凋亡顯色法

細胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個漸進的階段性過程。染色體DNA首先在內源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段，然后大約30%的染色體DNA在Ca2+和Mg2+依賴的核酸內切酶作用下，在核小體單位之間被隨機切斷，形成180-200 bp核小體DNA多聚體。因此在細胞凋亡晚期，DNA會被降解為180-200 bp的片段，斷裂的基因組DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脫氧核糖核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）是一種不依賴于模板的DNA聚合酶，可以催化脫氧核苷酸結合到斷裂的DNA分子3'-OH末端。因此TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)細胞凋亡檢測試劑盒可以用來檢測組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA的斷裂情況。其原理是在TdT酶的作用下，在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-OH末端摻入生物素標記的dUTP（Biotin-dUTP），隨后用辣根過氧化物酶（Horse-radish peroxidase，HRP）標記的鏈霉親和素（Streptavidin）(Streptavidin-HRP, SA-HRP)，檢測被生物素（Biotin）標記的DNA末端，最后通過加入HRP的底物混合液（DAB）進行顯色反應，使得凋亡細胞的細胞核被染成棕黃色，從而可以用普通光學顯微鏡檢測。

實驗流程

結果展示

實驗完成周期及交付標準

1. 實驗周期：2-3周

2. 交付標準：蠟塊、切片、染色圖片、實驗報告（實驗步驟、試劑、耗材等）

需確認的信息

1. 樣本的種屬

2. 樣本的類型（固定的組織or蠟塊or切片）

3. 是否提供試劑盒

4. 拍照要求